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为何ELISA实验血清样本都需要稀释?
点击次数:59 发布时间:2018/1/12

 

每一盒ELISA试剂盒里面都有一份对应的说明书,而每一份说明书里都会有写样本和稀释液的稀释比例,为什么样本都需要稀释呢?ELISA试剂盒实验血清为什么要稀释?有两个原因:

1)竞争抑制比较明显,应稀释竞争物;
2)以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。
血清稀释用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有效降低ELISA本底,当然如果你嫌麻烦我觉得用生理盐水替代PBS关系也不大。不管你是用直接竞争还是间接竞争,血清的稀释倍数肯定要事先确定,但也不用一点点,你做一个预试验即可,选择OD在1.0左右的稀释倍数,即你的竞争ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较敏感。

ELISA试剂盒实验稀释血清的步骤:
先把蛋白稀释一定的倍数,比如说10倍、20倍稀释(这样可以大体确定一个参数),将抗原进行一系列稀释包被微量反应板,再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤,再加酶结合物进行反应,经孵育洗涤后,加底物溶液显色,终止反应后分别测定O.D值,选择O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度。一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0,而不选择小于1.0的抗原浓度。阴性参考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的O.D值有明显差别。

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